Kiun ekipaĵon mi bezonas por fari mian BETMAT-teston pri bakteria endotoksino (BET)?
Kurante BET (Bakteria Endotoksina Testo) (ankaŭ nomata LAL-testo) postulas kelkajn specialigitajn reakciilojn, konsumeblajn materialojn kaj ekipaĵon por certigi precizecon, sentemon kaj eviti poluadon.
La Tri Primaraj BET-Metodaroj de tradiciaj LAL-reakciiloj.
La USP, Eur.P, kaj aliaj farmakopeoj rekonas tri ĉefajn kvantajn metodojn:
- Ĝel-Koagulaĵa Tekniko (Tradicia, Kvalita/Duonkvanta)
- Kineta Turbidimetria Metodo
- Kineta Kromogena Metodo
- Ekipaĵo por la Ĝel-Koagulaĵa Tekniko
Ĉi tiu estas la plej simpla metodo, bazita sur la formado de videbla ĝelo.
Esenca Ekipaĵo:
Akvobano aŭ Seka Bano-Inkubatoro: La plej kritika parto. Ĝi devas konservi tre stabilan temperaturon, tipe 37°C ± 1°C. Bloka hejtilo kun tubbreto estas ofta.
Vitrovaro Sen Pirogeno:
Specife, 10x75 mm aŭ 12x75 mm borosilikataj vitraj provtuboj.
Tubrakoj: Por teni la tubojn en la akvobano.
Tempmezurilo: Por preciza reakcio kaj inkubacia tempigo.
Mikropipetoj kaj Sterilaj, Pirogen-Liberaj Konsiloj: Por preciza alikvotado de specimenoj, normoj kaj LAL-reakciilo. Tipe volumoj de 100 µL estas uzataj.
pH-mezurilo:Por kontroli, ke la pH de la specimeno estas ene de la akceptebla intervalo (kutime 6,0 ĝis 8,0) por la testo, ĉar ekstremoj povas malhelpi la reakcion.
Laŭvola sed Tre Rekomendinda:
- LAL-Rekonstrua Stacio:
Rako por teni fiolojn dum rekonstruado de la LAL-reakciilo por eviti poluadon.
- Parafilmaj aŭ Tubaj Ĉapoj:
Por kovri tubojn kaj malhelpi vaporiĝon dum la inkubacia periodo.
- Ŝlosila konkludo por Gel-Clot:
La aranĝo estas relative malaltteknologia ol aliaj kvantaj metodoj, ĝi estas tradicia metodo kun ekonomia solvo por BET.
- Ekipaĵo por la Turbidimetriaj kaj Kromogenaj Metodoj
Temas pri instrumentaj metodoj, kiuj donas kvantajn rezultojn. La listo de ekipaĵoj similas por ambaŭ.
Esenca Ekipaĵo:
- LAL-testita spektrofotometro (endotoksina legilo) kun inkubatoro: Ĉi tiu estas la kerna instrumento.
- Ĝi devas kapabli legi kinetajn reakciojn laŭlonge de la tempo (kineta analizo).
- Ĝi enhavas enkonstruitan, precizan 37°C ± 0.2°C inkubatoron por teni la reakciajn putojn/tubojn.
Ĝi uzas specifajn ondolongojn:
- Turbidimetria: Tipe ĉirkaŭ 340 nm (por mezuri nubecon).
- Kromogena: Tipe ĉirkaŭ 405 nm (por mezuri la liberigon de flava kromoforo).
Programaro:
La spektrofotometro estas kontrolata per dediĉita programaro kiu:
- Regas la instrumenton.
- Kalkulas la norman kurbon.
- Kalkulas la endotoksinan koncentriĝon en la specimenoj.
- Administras datumojn por plenumo de regularoj (21 CFR Parto 11 se necese).
Pirogen-liberaj mikroplatoj aŭ kuvetoj:
Mikroplatoj (96-putoj) estas la moderna normo. Ili devas esti atestitaj sen pirogenoj.
Alternative, oni povas uzi pirogen-liberajn vitrajn aŭ plastajn kuvetojn.
Precizaj Mikropipetoj kaj Sterilaj, Pirogen-Liberaj Konsiloj:Eĉ pli granda precizeco estas bezonata ĉi tie. Multkanalaj pipetoj estas tre rekomendindaj por efikeco dum uzado de mikroplatoj.
Vortica Miksilo: Por certigi, ke normoj kaj specimenoj estas plene miksitaj.
pH-mezurilo:Kiel ĉe la ĝel-koaguliĝa metodo, por kontroli la pH-valoron de la specimeno.
Laŭvola sed Tre Rekomendinda:
- Aŭtomata Likvaĵa Manipulilo (Diluilo/Disdonilo): Por alt-trairaj laboratorioj, ĉi tio aŭtomatigas la disdonadon de LAL-reakciilo, specimeno kaj normoj en la mikroplaton, plibonigante precizecon kaj efikecon samtempe reduktante ripetan trostreĉon.
- Endotoksino-specifaj Programaraj Moduloj:Multaj vendistoj ofertas programaron antaŭvalidigitan por BET, simpligante agordon kaj plenumon de regularoj.
Fine malsamaj detektmetodoj postulas malsamajn detektinstrumentojn.
- Por testado de ĝelkoagulaĵaj endotoksinoj, necesas 37ºC-a ne-cirkulanta akvobano aŭ sekvarma inkubatoro. La truograndeco de la sekvarma inkubatoro devas kongrui kun la grandeco de la uzataj ĝelkoagulaĵaj provtuboj (kutime 10X75mm).
- Por kvanta endotoksina testado — inkluzive de kinetaj turbidimetriaj, kinetaj kromogenaj, finpunktaj kromogenaj kaj rCR-metodoj — la kovanta mikroplata legilo Elx808BET de BETMAT estas aplikebla. La Elx808BET estas ekipita per 405nm kaj 340nm filtriloj. Ĝi ankaŭ venas kun detektoprogramaro por prilabori kinetajn datumojn, subtenante plurajn metodikajn testojn.
- Por finpunkta kromogena endotoksino-detekto, vi ankaŭ povas uzi mikroplatlegilon aŭ spektrofotometron ekipitan per 405nm-filtrilo. Se la mikroplatlegilo ne havas temperaturregilon, akvobano aŭ seka varmo-inkubatoro estas necesa por varmigi la reakcian solvaĵon. Dum ĉi tiu procezo, oni atentu eviti endotoksinan poluadon.
- Por testado de endotoksinoj per Rekombina Faktoro C (rFC), necesas kovanta fluoreska mikroplata legilo kun 380/440 nm-filtriloj. Aldone al la endotoksina detektilo, uzantoj ankaŭ bezonas vortican miksilon por miksi endotoksinojn kaj pipeton (kun endotoksin-liberaj pintoj) por likva translokigo.